临床基因扩增实验又称 PCR实验 , 是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段 。 它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法 , 测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒 。
CEIDI西递最近接到了好几个关于PCR实验室装修的咨询 , 其中就有一个是要把医检所原有的实验室改造成PCR实验室的 , 因此在这里我们将详解PCR实验室改造的相关问题 。 首先需要了解的是PCR实验室并没有大家想象的那么复杂 , 实验室改造成基因扩增实验室 , 首要要实现的是功能布局 , 根据实验操作流程 , 将实验室改造为四个单独的工作区域:试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区 。
文章图片
PCR实验室改造
一、 PCR实验室改造平面布局
临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区 。 为避免交叉污染 , 进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行 , 即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区 。
各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行 。
二、PCR实验室空调通风系统设计及压力控制
PCR实验室并没有严格的净化要求 , 但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性 , 宜采用全送全排的气流组织形式 。 同时 , 要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求 。
1、试剂贮存和准备区
该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备 。 试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区 , 不得经过其他区域 。 试剂原材料必须贮存在本区内 , 并在本区内制备成所需的贮存试剂 。
对与气流压力的控制 , 本区并没有严格的要求 。
2、标本制备区
该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成 。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压 , 以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染 。 另外 , 由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染 , 所以应避免在本区内不必要的走动 。
3、扩增反应混合物配制和扩增区
该区域主要进行的操作为DNA或 cDNA扩增 。 此外 , 已制备的DNA模板和合成的 cDNA(来自样本制备区) 的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区) 制备成反应混合液等也可在本区内进行 。 在巢式 PCR测定中 , 通常在第一轮扩增后必须打开反应管 , 因此巢式扩增有较高的污染危险性 , 第二次加样必须在本区内进行 。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压 , 以避免气溶胶从本区漏出 。 为避免气溶胶所致的污染 , 应尽量减少在本区内的不必要的走动 。 个别操作如加样等应在超净台内进行 。
4、扩增产物分析区
该区域主要进行的操作为扩增片段的测定 。 如使用全自动封闭分析仪器检测 , 此区域可不设 。
本区是最主要的扩增产物污染来源 , 因此对本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压 , 以避免扩增产物从本区扩散至其它区域 。
三、PCR实验室设计关于污染的预防与控制
PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染 。 在实际工作中 , 常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然基因组DNA的污染;试剂的污染以及标本间的污染 。 由于一旦发生污染 , 实验就必须停止 , 直到找到污染源为止 , 而且实验结果必须作废 , 需重新进行实验 。 所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐 , 浪费人力物力 。 因此要避免污染 , 首先应是预防 , 而不是排除 。
1、工作区域的严格划分
(1)各个实验区域设置合理;
(2)各个实验区域要有明显的标记(如醒目的门牌或不同的地面颜色等) , 以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆 。
2、合理的系统设置
(1)合理的空调通风系统设置 , 尽量采用全送全排的空调系统;
(2)严格的气流压力控制 , 保证不同的实验区内不同的压力要求 。
3、规范的操作
(1)临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训 , 经培训合格后才能从事临床基因扩增检验的工作;
(2)在实验操作过程中 , 操作者必须戴手套 , 并经常更换 。 此外 , 操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施;
【试剂|PCR实验室改造装修设计、实验室如何改造成PCR实验室?CEIDI上海西递装修公司】(3)清洁工作及时、正确 。 实验工作结束后 , 必须立即对本区进行清洁 。 除常规的消毒液体对表面进行擦拭消毒或紫外线灯的照射消毒外 , 对一些实验设备还应进行高压消毒处理 。
4、严格的管理
(1)严格控制进出实验室的人员 。 与实验无关的人员不得随意进出实验室 , 有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门;
(2)在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服(如不同颜色) , 当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其它区域;
(3)尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性 。
(4)扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源 , 废液不能在实验室中倾倒 , 必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉 , 用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理 , 如焚烧等;
(5)扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质 , 应特别注意实验人员的安全防护 。
5、完备的实验室配套设施
完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件 , 应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器 , 如超净工作台、离心机、加样器等 。
推荐阅读
- 产品|泰晶科技与紫光展锐联合实验室揭牌
- 人工智能|正片来了!五期「AI大咖说」第一期,探秘清华大学AI&机器人实验室
- 琼海|数字孪生与智网互联创新实验室在琼成立 助力智慧海南建设
- 材料|火箭实验室将研发颠覆性的中子中型运载火箭
- 抗原|硕世生物:新冠病毒(SARS-CoV-2) 抗原快速检测试剂盒(自检)取得欧盟CE证书
- 病毒|安旭生物:新冠病毒抗原鼻腔检测试剂(自测)取得欧盟CE认证
- 技术|基础研究成果,怎样“从实验室跃上生产线”
- 希腊|“中国-希腊文物保护技术”启动,故宫参与实验室共建
- 生产线|基础研究成果,怎样“从实验室跃上生产线”
- 运营|LEC实验室效率大会圆满收官,“百舸联赢”计划正式启航!