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病毒载体包装过程是复杂的 ， 在做病毒包装实验中 ， 科研工作者常遇到一些问题 。 为了让大家在病毒包装这块少走弯路 ， 《细胞基因编辑小课堂栏目》特邀赛业生物细胞生物学产品经理针对病毒包装常见的问题为大家进行经验总结与心得分享 。 之前有两期给大家分享了慢病毒包装FAQ ， 回顾请点这里 。 有同学留言说想看腺相关病毒（Adeno-associated virus, AAV）包装 ， 有求必应的小赛这就安排上！
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Q1：AAV有哪些特性呢？
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Q2：实现AAV在动物体内表达需要注意哪些关键点？
1. 血清型的选择 。 AAV的血清型主要由AAV衣壳蛋白的结构所决定 ， 不同的衣壳蛋白结构识别不同的细胞表面受体 ， 因此血清型的选择会影响AAV的感染效率、组织亲和性、和开始表达的时间 。
2. 启动子的选择 。 是选择广谱性启动子还是特异性启动子 。 相比于血清型的组织特异性 ， 特异性启动子可实现细胞的特异性 ， 因此对特异性要求较高的研究 ， 可以选择某种细胞特异性表达的启动子 。
3. 注射方式 。 对于可以进行局部注射的组织器官 ， 采用局部多点注射靶器官可取得较好的特异性和表达效果 。
4. 病毒量及滴度 。 根据不同的靶器官组织和所使用的不同AAV血清型（扩散能力不同） ， 推荐注射的AAV量不同 ， 传递到组织中的病毒颗粒数量对于感染效果影响很大 。 但AAV使用量并不是越多越好 ， 过多的量可能出现病毒溢出 ， 而且根据我们的经验 ， 病毒量太多有时候甚至会出现表达降低的情况 。 想了解具体组织的病毒用量可以联系我们咨询 。
5. 检测时间 。 不同基因的表达高峰时间是不同的 ， 再加上AAV需要从单链DNA变成双链DNA ， 一般在2周可检测到基因表达 ， 如无抗体产生的影响 ， 基因的表达可持续表达半年以上 。
Q3：为什么很少用AAV做细胞感染？
主要是因为AAV转染细胞的表达效率较低 ， 且由于AAV是单链DNA ， 进入细胞后须经历一个由单链变成双链的过程才能进行转录翻译 ， 而在没有辅助病毒或辅助因子的情况下 ， 这种单链DNA复制形成双链DNA的过程十分缓慢 ， 因此存在表达延迟的情况 。
另外 ， 体外细胞的生长速率较快 ， 感染至细胞中的AAV会随着细胞分裂不断稀释 ， 进一步导致其表达水平降低 。 而在体内研究 ， 注射的组织细胞通常不会有那么快的增殖 ， 且各种AAV所携带的外源基因表达的因子较为丰富 ， 因此表达丰度和持续的时间更好 。
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