《实用免疫细胞与核酸》 电泳分析
在实际工作中常采用琼脂糖凝胶电泳 。一般情况下先在电泳缓冲液或凝胶中加1%溴化乙锭（EB）（每100ml加100μl） ， 然后将已经制备好的1%～2%琼脂糖凝胶（用电泳缓冲液配制）放入电泳槽内 ， 加入待测样品10μl ， 同时用分子量标准品作标记 。琼脂糖浓度应按分离DNA片段的大小进行选择 ， 一般用1.5%～2% ， 电泳电压75V ， 待样品进行凝胶内距胶末端1cm时 ， 切断电源 ， 取出凝胶在紫外灯下直接观察结果 。
由于溴化乙锭可与双链DNA形成结合物 ， 在紫外灯下能发射荧光 ， 使EB的荧光强度增强80～100倍 ， 所以 ， 电泳后凝胶在紫外灯下可直接观察 。一般肉眼观察DNA量可达10ng ， 其荧光强度与DNA含量成正比 。
DNA分子在凝胶中泳动速度决定于电荷效应及分子效应 。前者由所带净电荷量决定 ， 而后者与分子大小及构型有关 。按照DNA分子大小 ， 其凝胶浓度可做不同的调整 。有条件的实验室也可用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分析扩增的DNA片段 。
表22-2 电泳检测扩增结果 ， EB荧光显色（254nm）
琼脂糖（%）kbPAGR(%)bp0.360～53.5100～10000.620～1 0.710～0.85.080～5000.97～0.58.060～4001.26～0.412.040～2001.54～0.220.0
第四节 影响PCR的主要因素
PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA ， 然后才进行自动热循环 ， 最后进行产物鉴定与分析 。引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行 ， 临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工作 ， PCR自动热循环中影响因素很多 ， 对不同的DNA样品 ， PCR反应中各种成份加入量和温度循环参数均不一致 。现将几种主要影响因素介绍如下 。
推荐阅读
- 《寻觅理想》MP3歌词-富九
- 程钟龄蠲痹汤的作用功效
- 程钟龄麝香散的作用功效
- 程钟龄橘核丸的作用功效
- 程钟龄推气散的作用功效
- 程钟龄萆薢饮的作用功效
- 程钟龄黄矾散的作用功效
- 程钟龄秘精丸的作用功效
- 程钟龄追虫丸的作用功效
- 《失去你》MP3歌词-萧亚轩