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进行|【分子克隆服务】第1期 什么是分子克隆？

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分子克隆技术概念原理：
分子克隆技术又称基因克隆或DNA重组技术 ， 是在体外对DNA分子按照既定的目的和方案进行人工重组 ， 然后将重组分子（目的基因或DNA片段与合适的载体连接）导入到合适的受体细胞中 ， 使其在细胞中复制与扩增 ， 以获得多拷贝的DNA分子 ， 并使受体细胞获得新的遗传特征的过程 。
分子克隆技术流程： 1. 目的基因克隆
从特定的生物基因组或cDNA中分离和扩大繁殖获得足够量的目的基因或 cDNA序列 。
2. 载体的准备
选择合适的载体 ， 并对载体DNA进行克隆 ， 制备足够量的达到一定纯度的载体 。
3. 目的基因与载体的酶切、连接
选择适当的克隆策略 ， 将目的基因连接于载体的多克隆位点或启动子和终止子之间 ， 实现 DNA 重组 。
4. 重组DNA转化/转染/转导
将重组DNA转化/转染/转导进入大肠杆菌细胞、酵母菌细胞、植物外植体或动物细胞 。
5. 重组体的筛选与鉴定
利用载体上提供的选择标记基因进行筛选 ， 获得具有重组DNA分子的阳性克隆 ， 或通过植株再生、胚移植等手段获得转基因植株或转基因动物 。 还需对所获得的转化细胞、转基因植株或转基因动物进行分子鉴定 。
6. 重组体的大量培养 ， 外源基因表达效应分析与开发应用
将经筛选和鉴定出来的大肠杆菌、酵母转化细胞进行大量扩大繁殖 ， 对外源基因的表达蛋白进行分离与纯化并进行后续结构与功能的研究 。
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