前提|支原体qPCR（荧光定量）检测的结果诠释

2020-12-01 公司 知识科普 方法检测试剂定量通道内控阳性 的结果 荧光前提阴性污染 支原体 药典

支原体qPCR检测不仅用于细胞培养的支原体筛查，也用于生物制品行业的放行检测，但前提是要有方法验证。
无论是否遵循药典，支原体qPCR检测的结果判定都需要一定的标准。下面小编结合德国MB厂家的支原体qPCR说明书及相关文件，给予进一步的阐释。
一、荧光检测通道的结果诠释
用MB公司的qPCR试剂盒检测时， qPCR仪的FAM通道检测支原体荧光信号， HEX通道检测内控对照（简称IC）的荧光信号（如没有HEX通道，可用VIC通道）。 IC是用于监测qPCR反应是否正常。对于这两个通道， Ct＜40为阳性结果。 Ct≥40为阴性结果。支原体DNA和IC存在信号的竞争性抑制。
在阴性对照和阳性对照均结果正常的前提下，根据FAM?通道和HEX通道的检测结果，可判别样品是否有支原体污染。具体见下表：
表1. FAM?通道
(支原体) 和HEX? (IC) 通道的结果诠释

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需要说明的是：
内控对照可在支原体DNA抽提时加入。如果结果无效，则说明抽提失败，或者qPCR存在抑制。如果内控对照是在qPCR反应时加入，则说明qPCR存在抑制。
【前提|支原体qPCR（荧光定量）检测的结果诠释】二、对照与样品的结果诠释（适用于符合EP/JP的检测）
对于遵循EP/JP的检测，具体数据诠释见表2 。

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表2.结果判定的前提是：qPCR检测试剂盒
三、MB公司支原体qPCR试剂盒(经典法)
德国MB公司的支原体qPCR检测试剂盒(经典法)(英文名：Venor?Gem qEP)经过厂家全面的方法验证，符合欧洲药典/日本药典要求，适合细胞治疗， CAR-T ，抗体药、疫苗等临床项目申报和质检。

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需注意样本要先做DNA抽提，再进行qPCR检测。 MB还提供用于PCR/qPCR方法验证的配套的支原体10CFU、100CFU菌株标准品、特异性验证用支原体基因组DNA和细菌基因组DNA、支原体DNA绝对定量标准品（基因组拷贝数经严格标定）。

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