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污染|细胞房支原体污染如何预防？

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【污染|细胞房支原体污染如何预防？】支原体是目前已知一类能在无生命培养基上生长繁殖的最小的原核细胞微生物 ， 在自然界分布广泛 ， 无细胞壁 ， 直径为0.1-0.3μm ， 且形态易变 ， 极易通过除菌过滤器 。 大部分支原体繁殖速度比细菌慢 ， 细胞培养过程中遇到的支原体95%都来自于以下四种支原体：口腔支原体、精氨酸支原体、猪鼻支原体、莱氏无胆甾支原体 ， 其中莱氏无胆甾支原体为牛源性 。

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二．支原体的污染来源
（1）细胞之间交叉污染；
（2）细胞培养操作人员的口腔、皮肤等；
（3）工作环境或实验器材的污染；
（4）培养基的污染 。

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三．支原体污染的严重性
（1）细胞外形可以没有明显的变化 ， 支原体可以与细胞共存 ， 污染后细胞液不会死亡 ， 培养基一般不发生浑浊；
（2）使用被支原体污染的细胞做实验会严重影响实验的结果 ， 因为支原体会抑制细胞生长；导致染色体畸变；细胞膜抗原性改变；细胞复苏后存活率降低等 。
（3）影响细胞的代谢和功能：培液中的精氨酸被支原体大量消耗 ， 引起细胞蛋白质、DNA、rRNA、mRNA的合成障碍；支原体活动使培液成分发生改变（如发酵型支原体降解糖类产生酸性物质） ， 影响细胞代谢 。
（4）培养过程中细胞破碎较多 ， 培养基pH变化明显 ， 需要频繁更换新鲜培养基；
（5）细胞被支原体污染后会形成共生体系导致污染不断扩大 。

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四．细胞避免支原体污染的方法 要从多方面避免支原体的污染：
（1）严格操作要求：工作开始要先用75%酒精消毒手部以及袖口、瓶口等；在进行多种细胞培养操作时 ， 所用器具（如移液枪等）要严格区分；在进行换液或传代操作时 ， 注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口 ， 以免把细菌带到培养液中污染其他细胞 。 细胞培养实验室应制定严格的管理制度 ， 按照规范的实验程序操作 。
（2）保证细胞培养基和器材无菌 ， 器材一般都经过辐射处理 ， 基本可以保证无菌 ， 商业化CD培养基一般也能保证无菌 。 如实验室有发现支原体感染 ， 已经开启的培养基不宜继续使用 。
（3）在培养基中加入适量抗生素：对支原体比较有效的抗生素为四环素类和大环内酯类 ， 如卡那霉素50μg/ml ， 一些氟喹诺酮也有抑制支原体生长的作用 。 也有专用的支原体清除剂可用来预防细胞被支原体污染 ， 如在培养基中添加Plasmocin? prophylactic ， 工作浓度5μg/ml 。
从可靠来源引进、使用细胞:特别是知名的信誉良好的专门机构,如ATCC、基础医学细胞中心等,这些机构对细胞质量进行一系列检测 。 细胞一旦购置或从别处引入 ， 均应及早留种冻存 ， 一旦发生污染可重新复苏培养 。 建立良好的种子库管理规章制度 ， 并定期对实验室中的培养物进行支原体检测 。
控制环境污染：可以使用诺福支原体清除喷雾进行空间消毒 ， 干雾灭菌方案构成:诺福支原体清除剂 + 欧菲姆干雾灭菌设备 。

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欧菲姆干雾过氧化氢灭菌器 ， 采用了全球进的雾化技术 ， 雾化粒径平均达到3—5微米 ， 配合诺福支原体清除剂使用 ， 灭菌效果能对嗜热脂肪杆菌芽孢降低6个对数值 。 增效了空间扩散均匀性 ， 迅速弥漫充满整个密闭空间不放过每一处死角 ， 其均匀性、无残留及对机器无伤害特征非常吻合细胞房环境消毒及培养箱里面消毒 。
诺诺福支原体清除剂特点：
1 ， 杀菌效力广谱高效：同时杀灭200多种微生物 ， 高效清除支原体感染 ， 30分钟对黑色枯草芽孢、嗜热脂肪芽孢杆菌均能稳定达到6个对单位杀灭率 。
2 ， 欧盟进口 ， 无味、无毒 ， 对人体、环境安全 。
3 ， 验证资料齐全：可提供杀菌效力验证；残留验证；材料兼容性验证三项验证的详细资料 ， 可提供验证模版 。 易于通过GMP验证 。
欧菲姆干雾灭菌设备的特点
1 ， 全球进的雾化技术 。 干雾微粒均匀达到3－5微米 ， 全球领先的干雾技术 ， 完全不留死角 。
2 ， 杀菌时间超短 ， 1小时可完成整个灭菌流程 ， 电源连接 ， 方便移动 ， 是实验室、无菌室、细菌间、细胞房环境消毒 。
3 ， 体积小、重量轻 ， 可方便使用大空间洁净区（多点布置） ， 和小空间无菌室灭菌 。

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